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生化試劑盒 - 尿素氮含量檢測試劑盒說明書

尿素氮含量檢測試劑盒 

Urea Nitrogen Content Assay Kit

尿素氮含量檢測試劑盒說明圖1


一、尿素氮含量檢測試劑盒產(chǎn)品描述 

尿素氮(BUN)是人體蛋白質代謝的主要終末產(chǎn)物,構成了血液中絕大部分的非蛋白質氮。血清 尿素氮含量與腎小球功能密切相關,在一定程度上能夠反映出腎小球的濾過功能,可作為衡量腎功能 的主要指標之一。 脲酶水解尿素產(chǎn)生的 NH3-N,在強堿性介質中能夠與次氯酸鹽和苯酚生成水溶性藍色染料靛酚 藍,產(chǎn)物在 630 nm 處具有特征吸收峰,通過吸光值變化即可定量檢測尿素氮的含量。

二、產(chǎn)品內容附圖

尿素氮含量檢測試劑盒說明圖2

三、尿素氮含量檢測試劑盒產(chǎn)品使用說明 

測定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽/勻漿 器、可調式移液器、臺式離心機、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。

樣品處理(可根據(jù)預實驗結果適當調整樣本量及比例) ①組織:按照組織質量(g):蒸餾水體積(mL)為 1:(5-10)的比例(建議稱取 0.1 g 組織,加 入 1 mL 蒸餾水)處理樣品,冰浴勻漿,4℃ 12000 g 離心 15 min,取上清置于冰上待測。 ②細菌或細胞:離心收集細菌或細胞至離心管內,按照細菌或細胞數(shù)量(104 個):蒸餾水體積(mL) 為(500-1000):1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1 mL 蒸餾水)處理樣品,冰浴超聲破碎(功 率 300 W,超聲 3 s,間隔 7 s,總時間 3 min),4℃ 12000 g 離心 15 min,取上清置于冰上待測。 ③血清(漿)、培養(yǎng)液等液體樣本:直接檢測或適當稀釋后再進行檢測。

2.測定步驟 ①分光光度計/酶標儀預熱 30 min,波長調至 630 nm,蒸餾水調零。 ②在離心管中依次加入下列試劑

尿素氮含量檢測試劑盒說明圖3

吸光值測定:吸取 200 μL 反應液于 96 孔板或微量玻璃比色皿中,測定 630 nm 處吸光值,記為 A 測定、A 對照、A 標準和 A 空白;計算?A 測定=A 測定-A 對照,?A 標準=A 標準-A 空白。注:空 白管只需測定 1-2 次,每個測定管均需設一個對照管。 

標準曲線的建立:以 40、30、20、10、5、2.5 μg/mL 標準稀釋液濃度為橫坐標(x),以其對應的 ?A 標準為縱坐標(y),繪制標準曲線,得到標準方程 y=kx+b,將?A 測定帶入公式中得到 x(μg/mL)。

3.尿素氮含量計算

QQ截圖20210617092154.png


四、尿素氮含量檢測試劑盒注意事項 

①若A測定超出標準吸光值線性范圍:超出最高值建議將待測樣本適當稀釋后再進行測定;低于 最低值可適當增加樣本量重新制備待測樣本后再進行測定,計算時相應修改;

②顯色完成后應在1 h內完成測定,測定管顏色應與標準管顏色一致(藍色),若顯色為黃色或綠 色,則表明NH3-N濃度過高,應將待測樣本適當稀釋后再進行測定,計算時相應修改; 

③為保證結果準確且避免試劑損失,測定前請仔細閱讀說明書(以實際收到說明書內容為準), 確認試劑儲存和準備是否充分,操作步驟是否清楚,且務必取2-3個預期差異較大的樣本進行預測定, 過程中問題請您及時與工作人員聯(lián)系。


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